做實(shí)驗(yàn)的同行們，估計(jì)都遇到過(guò)液相色譜壓力“鬧脾氣”的時(shí)候。壓力曲線像過(guò)山車一樣上躥下跳，數(shù)據(jù)沒(méi)法看，實(shí)驗(yàn)進(jìn)度卡殼，心里那個(gè)急啊。今天咱們就來(lái)聊聊這個(gè)常見問(wèn)題，從現(xiàn)象到原因，再到解決辦法，一步步幫你理順。

一、先看看壓力不穩(wěn)長(zhǎng)什么樣

壓力不穩(wěn)通常分兩種：一種是壓力有規(guī)律地周期性波動(dòng)，另一種是壓力毫無(wú)規(guī)律地亂跳。前者往往指向某個(gè)系統(tǒng)部件的問(wèn)題，后者可能是多因素疊加。

直觀的就是看實(shí)時(shí)壓力曲線——正常的應(yīng)該是一條平穩(wěn)的直線，波動(dòng)范圍通常不超過(guò)設(shè)定壓力的1%-2%。如果曲線開始“跳舞”，那就要開始排查了。

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二、常見原因逐個(gè)數(shù)

1. 流動(dòng)相里的“小氣泡”

這是常見的原因之一。流動(dòng)相脫氣不徹底，或者溶劑瓶里的溶劑快用完了，都容易引入氣泡。

怎么判斷？觀察壓力波動(dòng)往往沒(méi)有規(guī)律，同時(shí)伴隨著基線噪聲增大。如果是purge閥或在線脫氣機(jī)工作異常導(dǎo)致脫氣不足，壓力波動(dòng)可能更明顯。

2. 泵的問(wèn)題

單泵或二元泵的某一個(gè)泵頭出問(wèn)題，都會(huì)導(dǎo)致壓力不穩(wěn)。

單向閥故障：閥球被污染卡住，或者閥座磨損。這時(shí)壓力往往會(huì)有規(guī)律的周期性波動(dòng)，頻率與泵的沖程一致。

柱塞桿或密封圈磨損：可能導(dǎo)致滲漏，壓力上不去且波動(dòng)。

比例閥或混合器問(wèn)題（對(duì)二元泵而言）：會(huì)導(dǎo)致混合不均勻，壓力波動(dòng)。

3. 進(jìn)樣器漏液

進(jìn)樣針或針座磨損、轉(zhuǎn)子密封圈損壞，都會(huì)導(dǎo)致微量滲漏。這種波動(dòng)往往在進(jìn)樣時(shí)或進(jìn)樣后更明顯。

4. 色譜柱“堵了”或“塌了”

柱頭篩板堵塞、柱床內(nèi)有空隙或塌陷，會(huì)導(dǎo)致流動(dòng)不暢，壓力異常升高且不穩(wěn)。如果柱效明顯下降，伴隨峰形異常，要優(yōu)先懷疑柱子。

5. 檢測(cè)器流通池有氣泡

流通池內(nèi)有微小氣泡通過(guò)，會(huì)造成壓力波動(dòng)和基線噪聲。通常觀察檢測(cè)器信號(hào)會(huì)更明顯。

6. 管路連接處微滲漏

特別是高壓部分的接頭，哪怕極微小的滲漏，也會(huì)導(dǎo)致壓力不穩(wěn)。有時(shí)滲漏很慢，肉眼看不到液滴，但壓力已經(jīng)受影響。

表1.HPLC壓力不穩(wěn)常見原因表

三、一步步排查，快速定位問(wèn)題

第一步：簡(jiǎn)化系統(tǒng)

卸下色譜柱，換上兩通（union）連接管路，觀察壓力。如果壓力平穩(wěn)，問(wèn)題很可能在色譜柱；如果不穩(wěn)，問(wèn)題在柱前系統(tǒng)（泵、進(jìn)樣器、管路等）。

第二步：分段檢查

檢查流動(dòng)相：是否新鮮配制、充分脫氣？換個(gè)新配的流動(dòng)相試試。

檢查溶劑瓶：液位是否足夠？吸濾頭是否堵塞？輸液管里有沒(méi)有連續(xù)的氣泡？

檢查泵：運(yùn)行每個(gè)泵單獨(dú)purge，聽聲音是否正常，觀察出口液流是否連續(xù)。如果有條件，可以測(cè)試每個(gè)泵的流量準(zhǔn)確性。

檢查進(jìn)樣器：多次進(jìn)樣空白，觀察壓力波動(dòng)是否與進(jìn)樣動(dòng)作相關(guān)。

檢查管路接頭：用紙巾仔細(xì)擦拭每個(gè)接頭，看是否有濕潤(rùn)痕跡。

第三步：關(guān)注細(xì)節(jié)

室溫是否穩(wěn)定？溫度波動(dòng)大會(huì)影響流動(dòng)相粘度，進(jìn)而影響壓力。

近是否更換過(guò)流動(dòng)相？不同溶劑的粘度、可壓縮性不同，壓力會(huì)有變化，這可能是正常的。

儀器是否長(zhǎng)時(shí)間未用？可能是密封圈干縮導(dǎo)致微滲漏。

表2.HPLC壓力不穩(wěn)系統(tǒng)排查步驟表

四、針對(duì)性解決辦法

對(duì)氣泡問(wèn)題：

充分脫氣：超聲、抽濾、通惰性氣體（如氦氣），并用好在線脫氣機(jī)。

保持溶劑瓶液位，及時(shí)添加。

適當(dāng)提高系統(tǒng)壓力（如加個(gè)背壓管），減少氣泡形成。

對(duì)泵問(wèn)題：

清洗單向閥：拆下用異丙醇超聲清洗，或者用專用工具沖洗。

更換密封圈：這是常規(guī)耗材，按使用時(shí)長(zhǎng)定期更換。

聯(lián)系工程師：如果是比例閥、混合器或泵頭其他問(wèn)題，可能需要專業(yè)維修。

對(duì)進(jìn)樣器問(wèn)題：

清洗或更換進(jìn)樣針、針座。

更換轉(zhuǎn)子密封圈（通常建議定期更換）。

對(duì)色譜柱問(wèn)題：

嘗試反向沖洗柱子（注意柱子是否允許）。

更換柱頭篩板或修剪柱頭（有一定風(fēng)險(xiǎn)，需謹(jǐn)慎）。

如果柱效嚴(yán)重下降，考慮更換新柱。

對(duì)漏液?jiǎn)栴}：

重新擰緊接頭（不要過(guò)度用力，以免損壞）。

更換損壞的管路、接頭或密封件。

五、養(yǎng)成良好的習(xí)慣，預(yù)防為主

流動(dòng)相要干凈：用HPLC級(jí)溶劑，水要用超純水，流動(dòng)相過(guò)濾、脫氣不能省。

儀器要愛惜：避免突然的壓力變化，更換流動(dòng)相時(shí)要緩和過(guò)渡。

耗材定期換：密封圈、針座、濾頭等，按廠家建議或?qū)嶋H使用情況定期更換。

柱子好好用：樣品要干凈，用保護(hù)柱，避免突然的高流速?zèng)_擊。

用完好好收：長(zhǎng)時(shí)間不用，要按規(guī)程清洗、保存系統(tǒng)。

表3.HPLC壓力不穩(wěn)預(yù)防措施表

液相色譜壓力不穩(wěn)是個(gè)“綜合征”，可能原因很多，但只要有條理地排查，大多數(shù)問(wèn)題都能解決。平時(shí)多觀察儀器狀態(tài)，做個(gè)實(shí)驗(yàn)記錄，時(shí)間長(zhǎng)了，你一聽聲音、一看曲線，大概就能猜到問(wèn)題在哪。實(shí)驗(yàn)不易，且做且珍惜。希望這些經(jīng)驗(yàn)?zāi)軒湍闵僮唿c(diǎn)彎路，實(shí)驗(yàn)順利，數(shù)據(jù)漂亮！

常見問(wèn)題(FAQ)

Q1：壓力波動(dòng)總是發(fā)生在實(shí)驗(yàn)開始后半小時(shí)左右，可能是什么原因？

這個(gè)問(wèn)題很可能與溫度平衡有關(guān)。實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度或柱溫箱溫度未充分穩(wěn)定時(shí)，流動(dòng)相和色譜柱的溫度會(huì)持續(xù)變化，導(dǎo)致粘度變化，從而引起壓力漂移或波動(dòng)。特別是使用乙腈-水體系時(shí)，混合過(guò)程會(huì)吸熱，溫度影響更明顯。

解決辦法：

實(shí)驗(yàn)前，提前打開柱溫箱，讓色譜柱在設(shè)定溫度下平衡至少30分鐘。同時(shí)，讓流動(dòng)相以較小流速（如0.2-0.5 mL/min）在系統(tǒng)中循環(huán)10-15分鐘，使整個(gè)流路溫度達(dá)到平衡，再進(jìn)行正式分析。此外，檢查實(shí)驗(yàn)室空調(diào)出風(fēng)口是否直接對(duì)著儀器，避免局部溫度波動(dòng)。

Q2：壓力突然降到零，然后又恢復(fù)正常，偶爾發(fā)生，怎么回事？

這種“斷崖式”下跌然后恢復(fù)，常見的原因是泵頭或管路中存有微小氣泡。氣泡進(jìn)入高壓泵頭后，在壓縮瞬間無(wú)法形成有效壓力，導(dǎo)致壓力驟降；當(dāng)氣泡被排出后，壓力又恢復(fù)正常。也可能與單向閥閥球偶爾卡住有關(guān)。

解決辦法：

首先，對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行充分脫氣，并確保溶劑瓶吸濾頭完全浸入液面下，無(wú)氣泡吸入。其次，以較高流速（如3-5 mL/min）進(jìn)行泵的Purge操作（不接色譜柱），持續(xù)5-10分鐘，可有效排出泵頭內(nèi)的殘留氣泡。如果問(wèn)題仍偶爾出現(xiàn)，可嘗試用異丙醇低流速?zèng)_洗系統(tǒng)，或?qū)蜗蜷y進(jìn)行清洗。

Q3：換了一根新色譜柱后壓力變得不穩(wěn)，而舊柱子沒(méi)問(wèn)題，是柱子壞了嗎？

不一定。這種情況很可能是新色譜柱與系統(tǒng)連接處存在死體積或微滲漏。新柱子的接口螺帽或卡套可能因公差或安裝手法問(wèn)題，未能與系統(tǒng)管路形成完美的零死體積連接，導(dǎo)致微小空隙，引起壓力波動(dòng)和譜峰展寬。

解決辦法：

首先，重新安裝色譜柱：將柱子入口端接頭小心擰開，剪掉管路前端一小截（確保切口平整），按照正確手法（先手動(dòng)旋緊，再用扳手旋轉(zhuǎn)1/4-1/2圈）重新擰緊。然后，用兩通代替柱子連接系統(tǒng)，觀察壓力是否平穩(wěn)，以確認(rèn)問(wèn)題是否在柱子接口。如果重新安裝后問(wèn)題依舊，再聯(lián)系供應(yīng)商排查柱子本身的可能性（如柱床填充問(wèn)題）。

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