高效液相色譜的壓力問(wèn)題，咱們實(shí)驗(yàn)室的人聚在一起，十次有八次在聊這個(gè)。上周隔壁組的老張，因?yàn)閴毫ν蝗粵_高，一根用了不到三個(gè)月的新柱子就報(bào)廢了，心疼得直拍大腿。其實(shí)吧，壓力這玩意兒就像儀器的心跳，跳得太快太慢，都說(shuō)明身體可能出了狀況。

別上來(lái)就問(wèn)范圍，先看你開(kāi)的是什么“車(chē)”

新手愛(ài)問(wèn)：“老師，正常壓力應(yīng)該是多少？”這問(wèn)題真沒(méi)法給個(gè)死數(shù)字。這么說(shuō)吧：

如果你用的是咱們常見(jiàn)的普通液相色譜，它們的設(shè)計(jì)壓力一般在400 bar（約6000 psi）以?xún)?nèi)。日常做做常規(guī)樣品，壓力在100到300 bar之間波動(dòng)，都屬于它的“舒適區(qū)”。這時(shí)候儀器運(yùn)行平穩(wěn)，數(shù)據(jù)也漂亮。

但你要是用的是近幾年流行的超高效液相色譜，那完全是另一回事了。它用的是更細(xì)的填料，管路也更細(xì)，就是為了更高的效率。它的“工作區(qū)間”動(dòng)輒就在600到1000 bar以上，壓力低了反而可能說(shuō)明流速?zèng)]上去或者系統(tǒng)有異常。這就好比跑車(chē)和家用轎車(chē)，發(fā)動(dòng)機(jī)的轉(zhuǎn)速能一樣嗎？

所以，看壓力健不健康，首先得看你家儀器銘牌上寫(xiě)的大耐受壓力是多少。業(yè)內(nèi)有個(gè)不成文的規(guī)矩：讓日常工作壓力保持在大值的70%到80%以下，是穩(wěn)妥、養(yǎng)機(jī)器的做法。別總把儀器逼到極限。

表1.不同類(lèi)型液相色譜儀壓力參數(shù)參考

相關(guān)產(chǎn)品推薦：1、高效液相色譜儀  2、超高效液相色譜儀  3、制備液相色譜儀  4、專(zhuān)用液相色譜儀

壓力不穩(wěn)？先自查這幾個(gè)“習(xí)慣動(dòng)作”

壓力出毛病，八成是日常操作里的細(xì)節(jié)沒(méi)到位。根據(jù)我們實(shí)驗(yàn)室多年踩坑總結(jié)的經(jīng)驗(yàn)，問(wèn)題往往出在以下幾點(diǎn)：

流動(dòng)相，這是頭號(hào)嫌疑犯。 很多新人圖省事，用自來(lái)水或純水機(jī)里隔夜的水配緩沖鹽。里面滋生的微生物和雜質(zhì)，很容易堵住柱子入口的篩板，壓力就會(huì)像爬樓梯一樣慢慢升高。必須用新鮮制備的純凈水或水相，好現(xiàn)配現(xiàn)用。有機(jī)相記得用色譜級(jí)的，別心疼那點(diǎn)錢(qián)。

還有，實(shí)驗(yàn)記錄本上記好：換流動(dòng)相時(shí)，尤其從高比例有機(jī)相換到高比例水相時(shí)，一定要做過(guò)渡沖洗。不然鹽析出來(lái)，堵在泵里或柱子里，那可就是大麻煩。

樣品，必須“干干凈凈”。 老張那根廢掉的柱子，后來(lái)拆開(kāi)看，進(jìn)口端都黑了一層。他們做的中藥提取物，雖然離心了，但沒(méi)過(guò)濾。樣品里的細(xì)小顆粒和強(qiáng)吸附雜質(zhì)，就是色譜柱的“慢性毒藥”。上機(jī)前，務(wù)必過(guò)0.22或0.45微米的濾膜，這是保護(hù)柱子經(jīng)濟(jì)有效的一招。加一個(gè)保護(hù)柱，相當(dāng)于給主柱上了個(gè)保險(xiǎn)，雖然多花點(diǎn)小錢(qián)，但絕對(duì)值。

系統(tǒng)，有沒(méi)有“內(nèi)傷”。 壓力如果像心電圖一樣上下跳，很可能是泵的單向閥臟了，或者里面進(jìn)了微小氣泡?？梢栽囋囉卯惐汲暻逑磫蜗蜷y。如果是壓力緩慢下降，大概率是哪里漏液了。重點(diǎn)檢查泵頭密封圈、進(jìn)樣針座和柱子兩頭的接頭，這些地方是泄漏的高發(fā)區(qū)。平時(shí)做完實(shí)驗(yàn)，多用純甲醇或乙腈低流速?zèng)_一沖系統(tǒng)，保持管路暢通。

表2.影響液相色譜儀壓力的關(guān)鍵因素及應(yīng)對(duì)措施

當(dāng)壓力真的報(bào)警了，別慌，按這個(gè)順序排查

第一步：卸下色譜柱，換上兩通。 用純甲醇以1.0 mL/min的流速?zèng)_系統(tǒng)，看壓力是多少。如果此時(shí)壓力依然很高（比如超過(guò)100 bar），那問(wèn)題肯定在儀器流路上（泵、混合器、檢測(cè)器流通池等）。

第二步：如果換上兩通壓力正常，再接上柱子試試。 壓力高了，就是柱子或保護(hù)柱的問(wèn)題。先換個(gè)新的保護(hù)柱，如果壓力恢復(fù)正常，萬(wàn)事大吉；如果還高，那可能就是主柱堵了，需要嘗試反向沖洗或聯(lián)系柱子廠(chǎng)商。

第三步：檢查簡(jiǎn)單的。 流動(dòng)相瓶里的濾頭是不是太久沒(méi)洗，被堵住了？瓶子里溶劑是不是快用光了，泵抽進(jìn)了空氣？

表3.液相色譜儀壓力異常排查步驟

說(shuō)到底，高效液相色譜是個(gè)精細(xì)活兒，壓力是它誠(chéng)實(shí)的“語(yǔ)言”。每天開(kāi)機(jī)后，花一分鐘看看基線(xiàn)壓力穩(wěn)不穩(wěn)定，跟昨天的記錄對(duì)比一下。這個(gè)小小的習(xí)慣，能幫你提前發(fā)現(xiàn)很多潛在問(wèn)題，避免像老張那樣“車(chē)毀柱亡”的悲劇。儀器維護(hù)好了，它回報(bào)給你的是穩(wěn)定、可靠的數(shù)據(jù)。這才是咱們做實(shí)驗(yàn)的人，大的底氣。

常見(jiàn)問(wèn)題(FAQ)

問(wèn)1：老師，我剛換了根新柱子，為什么壓力比舊柱子高了不少？這正常嗎？

答：這多半是正常的，先別緊張。新柱子里的填料裝填得非常緊密，流動(dòng)相通過(guò)時(shí)的阻力自然會(huì)大一些，壓力高點(diǎn)很正常。你可以先走一段時(shí)間，讓流動(dòng)相充分浸潤(rùn)和平衡新柱子，壓力通常會(huì)穩(wěn)定到一個(gè)值。如果壓力高得離譜（比如接近系統(tǒng)上限），或者持續(xù)飆升，那就要檢查一下：1）你用的流動(dòng)相和新柱子是不是兼容（比如正相柱誤用了反相條件）；2）你樣品溶劑的強(qiáng)度是不是太強(qiáng)，導(dǎo)致樣品在柱頭析出。新柱子就像新鞋，需要一段“磨合期”。

問(wèn)2：我做梯度洗脫的時(shí)候，壓力為什么會(huì)跟著變？有時(shí)高有時(shí)低的。

答：這是梯度洗脫的典型特征，壓力曲線(xiàn)像條拋物線(xiàn)是正常的。因?yàn)橛袡C(jī)相（比如乙腈、甲醇）和水相的粘度不同，兩者混合比例變化時(shí)，混合液的粘度也會(huì)變。通常在中間某個(gè)比例時(shí)（比如水和乙腈各一半左右），粘度大，壓力就會(huì)出現(xiàn)一個(gè)峰值。你只要確保這個(gè)壓力峰值不超過(guò)儀器的安全上限就行。如果發(fā)現(xiàn)梯度過(guò)程中壓力劇烈跳動(dòng)或出現(xiàn)毛刺，那可能是混合器里有氣泡或者混合不均勻，需要檢查脫氣情況和泵的混合效率。

問(wèn)3：壓力顯示正常，但色譜圖的分辨率就是不好，峰又寬又拖尾，這和壓力有關(guān)系嗎？

答：壓力正常但效果不好，這說(shuō)明流動(dòng)相系統(tǒng)是通暢的，但問(wèn)題可能出在“化學(xué)層面”上。這時(shí)候，壓力這個(gè)“健康指標(biāo)”雖然合格，但“治病”得找其他原因。你可以重點(diǎn)排查：1）柱效是否下降：柱子用了很久，填料塌陷或污染，會(huì)導(dǎo)致峰變寬，可以測(cè)一下柱效；2）流動(dòng)相pH和添加劑是否合適：對(duì)于酸性或堿性化合物，沒(méi)調(diào)節(jié)好pH或沒(méi)用對(duì)離子對(duì)試劑，就容易拖尾；3）樣品與柱子是否匹配：樣品可能在當(dāng)前條件下保留太弱或太強(qiáng)。壓力好比汽車(chē)的油壓表，油壓正常不代表發(fā)動(dòng)機(jī)功率就一定足，也可能是火花塞老了或者油品不好。

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